Serodiagnoza hepatitisa

Ostavite komentar 1.249

Da bi se utvrdio virus hepatitisa, kako bi se dobile informacije o podrijetlu bolesti, uvjeti i uzroci nastanka, provodi se serodiagnoza hepatitisa C, b, a. Identifikacija seroloških markera omogućuje vam dijagnozu i pravilno liječenje. Markeri uključuju viralne proteine, specifična protutijela koja tijelo proizvodi kao odgovor na infekciju i virusne nukleinske kiseline.

Što je to?

Serodiagnoza - prepoznavanje etiologije bolesti otkrivanjem protutijela u krvi. Serološki markeri su kasna dijagnostika, budući da su reakcije moguće 10-12 dana od pojave bolesti. Serodiagnostičke studije provode se na:

  • dijagnosticirati bolest - odrediti prisutnost protutijela u krvi, koristeći standardne antigene;
  • identificirati patogena - identificirati nepoznate antigene.

Za serodiagnozu koristite: bakterijske stanice; plazmatskih stanica i limfocita, tumora i bolesnih stanica; topljivi sastojci. Postoji 6 skupina seroloških reakcija:

  1. Reakcije koje se javljaju s povećanjem Ag čestica.
  2. Dopunska vezujuća reakcija i imunološka hemoliza.
  3. Reakcija imunofluorescencije.
  4. Reakcije protiv neutralizacije
  5. Reakcija s fagocitozom.
  6. Reakcije imunosorbenske analize pomoću antigena i protutijela.
Natrag na sadržaj

Što pokazuje analiza?

Provođenje serodiagnoze propisane pacijentima, ako iz nekog razloga nije moguće dijagnosticirati, isključujući bolest. Analiza identificira vrstu patogena i pomaže u dijagnosticiranju. Također, serodiagnoza vam omogućuje da odaberete najbolju mogućnost liječenja. Simptomi za testiranje: nerazumno djelovanje slabosti, slab apetit, mučnina, obezbojenje izmeta i urina, žuta koža. Pravodobna serodiagnoza potvrđuje ili negira infekciju i određuje stupanj bolesti.

Značajke serodiagnoze i tip hepatitisa

Školjka svakog virusa ima svoj vlastiti skup proteina. A aminokiseline koje čine protein se smatraju nekom vrstom koda. Ovaj kod je marker za serodiagnozu. Hepatitis A markeri su anti-HAV IgM i IgG. Označivači hepatitisa B - HBcAg, HBsAg, HBeAg. Markeri virusa C - HBCAg. Za serodiagnozu virusa A koriste se: IEM (imunoelektronska mikroskopija), CSC (vezanje komplementa), RIA (upotreba obilježenih Anti i Ag), REMA (reakcija antitijela enzima). Serodiagnoza za virus B koristi RIA, REMA, RPG (precipitaciju u gelu) i RIGA (neizravna hemaglutinacija). RIGA koristi eritrocite koji su napunjeni s HBsAg. Za serodiagnozu hepatitisa C upotrijebljen je enzimski imunoanalizu.

Biljezi hepatitisa A

Studija hepatitisa A ima za cilj određivanje IgM i IgG. Ovi pokazatelji pojavljuju se u krvi čim se povećava razina serumskih enzima u tijelu. Anti-HAV IgM - je pokazatelj razine antitijela M virusu hepatitisa. Nakon infekcije, pokazatelj raste i do pojave prvih simptoma, krvni test će pokazati pozitivan rezultat. Anti-HAV IgG - ova klasa je određena 10 tjedana nakon infekcije u tijelu. Indikator najčešće ostaje visok nakon oporavka, što ukazuje na to da započinje proces formiranja imuniteta na virus tipa A.

Uz pomoć HBsAg markera, hepatitis B može se otkriti u ranoj fazi, antigen se očituje u 27-41 dana nakon infekcije u tijelu.

Hepatitis B markeri

Studija ima za cilj identificirati antigene i protutijela. Serodiagnoza vam omogućuje da napravite dijagnozu i predvidite ishod bolesti. Za svaku fazu detektira se drugačiji HBV marker. Tijekom razdoblja inkubacije, antigen se pohranjuje u krvi 2 do 5 mjeseci. Pokazatelj infekcije je istodobno određivanje HB i HB. Na početku oporavka, HBc i HBe nestaju iz krvi, formiraju se anti-HBc, kasnije se otkrivaju protutijela na sve vrste antigena u krvi. Prisutnost HbsAg ukazuje na infekciju, ako je antigen u krvi dulji od šest mjeseci, onda je bolest u kroničnoj fazi. Anti-HbsAg - pokazuje da su antitijela nastala u tijelu, a imunološki sustav se aktivno bori protiv virusa. HbsAg se detektira neko vrijeme nakon oporavka. Anti-HbcAg se detektira s simptomima i nastavlja se tijekom cijelog razdoblja.

U laboratorijskim istraživanjima otkrivene su dvije vrste antitijela: IgM - sintetiziran je u ranim fazama i znak je nedavne infekcije ili visoke aktivnosti virusa. IgG - nastalo 2-3 mjeseca nakon infekcije, daje imunitet. Indikator HbeAg ukazuje na aktivnost infekcije. Pacijenti koji imaju antigene u svojoj krvi opasni su za prijenos virusa, pa treba paziti. Kada se otkrije anti-HbeAg, počinje se formirati imunitet.

Hepatitis C markeri

Virus hepatitisa C neaktivno se replicira, tako da postoje poteškoće u dijagnozi infekcije. Jedini način za otkrivanje C virusa je otkrivanje RNA. Njegovo određivanje provodi se enzimskom imunološkom analizom, identificirajući količinu Anti-HCV. Protutijela su otkrivena 4-6 tjedana nakon što virus uđe u krv. U tom razdoblju počinje stvaranje i cirkulacija IgM. Nakon 3 mjeseca započinje sinteza IgG. Dugotrajna detekcija IgM ukazuje na aktivnost virusa i kronični stadij bolesti. U kroničnom obliku, detekcija IgM ukazuje na oštećenje jetre. Rezultat enzimskog imunološkog ispitivanja nije osnova za dijagnozu, metoda se koristi kao probirni test za identificiranje kroničnog oblika. Nakon što su pronašli protutijela na HCV i za sumnju na hepatitis C, potrebno je proći sveobuhvatni laboratorijski pregled.

Enzimski imunoanalizu za serodiagnozu može otkriti protutijela na hepatitis C u 95% slučajeva kroničnog oblika, au akutnom obliku točnost metode iznosi 50-70%.

Serodiagnoza nema 100% specifičnosti i osjetljivosti u dijagnozi virusnog hepatitisa. Stoga, pri procjeni rezultata, potrebno je uzeti u obzir simptome i koristiti nekoliko testova za dijagnozu koja potvrđuje rezultat. Pri evaluaciji rezultata seroloških istraživanja potrebno je uzeti u obzir povijest bolesti, informacije o prošlim bolestima i cijepljenju, kao i eventualni kontakt s izvorom infekcije.

Serološka dijagnoza virusnog hepatitisa

Dijagnoza počinje ispitivanjem pacijenta. Za pravilnu i pravodobnu dijagnozu "virusnog hepatitisa", liječnici prvo pregledavaju pacijenta, upućuju ga da uzima testove na krvi i urinu.

Prije svega, obratiti pažnju na takve karakteristične simptome početnog razdoblja bolesti kao letargija, opća mišićna slabost, gubitak apetita, mučnina, nelagoda u trbuhu, zamračivanje boje urina, povećanje i zadebljanje jetre, povećanje osjetljivosti boli na donjem rubu. Općenito, analiza liječnika krvi obratiti pažnju na sadržaj leukocita, limfocita, ESR.

Oni se bave biokemijskim testovima krvi i urina kako bi se procijenio stupanj oštećenja jetre i potvrdili je li žutica povezana s upalom jetre. Najznačajnija je razina žučnog pigmenta - bilirubina, koji nastaje u jetri kao rezultat raspada crvenih krvnih stanica.

Normalno, bilirubin je vezan proteinima krvi i nema toksičnog učinka na tkivo tijela. S hepatitisom, koncentracija slobodnog i vezanog bilirubina u krvi oštro raste. Kada prelazi 200-400 mg / l, žutica postaje vidljiva u oku.

Oštećenje hepatitisa govori o povećanju razine transaminazne aktivnosti - ALAT i AST, koji ulaze u krv iz jetrenih stanica kroz oštećene membrane. Postoje i posebni testovi za stanje koagulacijskog sustava krvi, u kojem su uključeni proteini sintetizirani u jetri. Pozitivna reakcija urina na urobilin ima dijagnostičku vrijednost.

Dokaz o oštećenoj funkciji jetre je timolski test. Promjena protrombinskog indeksa karakterizira ozbiljnost virusnog hepatitisa, a povećanje aktivnosti alkalne fosfataze, ukupni bilirubin, ukazuje na kršenje sekretorske funkcije jetre. Reakcija mokraće na žučne pigmente na početku bolesti je mnogo manje pozitivna.

U dijagnozi bez malog značaja, i akutni i kronični oblici virusnog hepatitisa dani su ultrazvučnim pregledom organa trbušne šupljine. Pomoću ove metode, liječnici mogu odrediti promjene koje nisu otkrivene vanjskim pregledom: povećana jetra, sužavanje jetrenih vena, induriranje i zadebljanje zidova, znakovi upale žučnog mjehura i gušterače, prošireni portal i slezene vene, povećana slezena, povećani limfni čvorovi, Najvažnija dijagnostička metoda, osobito kronični hepatitis, je biopsija jetre.

Metode za otkrivanje protutijela i antigena u krvi i drugih tjelesnih tekućina uključuju serološku dijagnostiku. Za ranu dijagnozu virusnog hepatitisa, uključujući aničke, asimptomatske oblike, određuje se prisutnost virusnih proteina (antigeni, koji se nazivaju i virusni hepatitisni markeri) ili antitijela na njih korištenjem imunoenzimske analize (ELISA) u serumu. Dodatno, ELISA se dopunjuje kad god je to moguće lančana reakcija polimeraze (PCR), koja omogućuje određivanje prisustva virusnih nukleinskih kiselina u serumu - DNA virusa hepatitisa B, RNA virusa drugih hepatitisa, što je osobito važno za početak pravodobnog liječenja.

Enzimski povezani imunosorbentni test (ELISA) - univerzalna je metoda imunološke dijagnoze koja se u praksi često koristi. Osmišljen je za otkrivanje virusnih proteina (antigena) ili protutijela koja proizvodi imunološki sustav kao odgovor na prodiranje virusa u ljudsko tijelo. Ti su bjelančevine osobiti markeri (oznake) ili znakovi čija prisutnost omogućuje preciznu dijagnozu, procjenu prirode bolesti, pomoć liječniku u odabiru odgovarajućeg liječenja. Ova metoda temelji se na dobro poznatoj interakciji antigena i antitijela.

Kako bi se identificirali antigeni, razne komercijalne tvrtke proizvode testne sustave koji su polistirenske ploče s 96 jažica. Na dnu bušotina, antitijela su unaprijed adsorbirana ("sutured") na jedan ili drugi antigen patogena, na primjer na površinski antigen hepatitisa B virusa - HBs-antigena.

U prvoj fazi, uzorak se dodaje u svaku jažicu, na primjer, pacijentov krvni serum u različitim razrjeđenjima, koji sadrže još neodređen virusni protein (antigen). Ako ovaj protein (antigen) "prizna" svoje protutijelo, onda se njihovo vezanje javlja. To znači da bolesnikov serum sadrži antigen, antitijela na koja su sorbirana na dnu ploče.

Da bi se vidjeli rezultati ove reakcije, postoji sljedeća faza, pri čemu se spoj dodaje kompleksu "antigen-antitijelo" koji se veže na protutijelo. Ovaj spoj sadrži enzim kao što je hrena peroksidaza. Kad se dodaje supstrat, potonji se razdijeli, a zatim se boji otopina u žuto-smeđoj boji.

U sljedećoj fazi, svaka jažica temeljito se opere od neizreagiranih komponenti. U tim bušotinama gdje je antigen, kao u našem slučaju, potpuno vezan za protutijelo, više ne može stupiti u interakciju s dodanim spojem.

Stoga se uklanja iz bušotine tijekom pranja. Kako se razrjeđuje serum, sadržaj protutijela u njemu se smanjuje i više nisu u stanju potpuno vezati antigen. U tim jažicama, spoj koji sadrži enzim veže se na antigen i ostaje u jažici nakon pranja. U sljedećoj fazi dodajte podlogu i vidite rezultate reakcije, koji se ocjenjuju vizualno ili pomoću spektrofotometra.

Tako smo ustanovili da serumski uzorak pacijenta sadrži HBs antigen. Također možete saznati njegovu količinu ili titar, određujući zadnje razrijeđenje seruma, gdje se pojavila žuta boja. Što je stupanj razrjeđivanja veći, to je više virusa sadržan u krvi pacijenta.

Slično tome, može se odrediti prisutnost protutijela na određeni uzročni agens virusnog hepatitisa. Samo u tim slučajevima koriste se dijagnostički testni sustavi s "ušivenim" na dno bunarića, a ne s protutijelima, ali s poznatim antigenima. Prednosti ove metode su visoka osjetljivost i specifičnost, jednostavnost reakcije, mogućnost ispitivanja velikog broja pacijenata u isto vrijeme. Među nedostatkom metode su i potrebe posebne skupe opreme i odgovarajuće kvalifikacije osoblja.

Metoda lančane reakcije polimeraze

U suvremenoj laboratorijskoj dijagnostici, PCR zauzima posebno mjesto. Metoda PCR podigla je kliničku laboratorijsku dijagnostiku na bitno različite visine - razinu određivanja nukleinskih kiselina (DNA i RNA), koja omogućuje izravno otkrivanje infektivnog agensa ili genetske mutacije u bilo kojem biološkom mediju.

U ovoj PCR metodi, teoretski se može otkriti jedna željena molekula nukleinske kiseline među milijunima drugih. S gledišta kliničke medicine, definicija nukleinske kiseline jednaka je otkrivanju patogena u predmetu istraživanja.

Poznato je iz biologije da nukleinske kiseline (DNA ili RNA) posjeduju svojstvo samo-reprodukcije (reprodukcije). Ovo načelo zasniva na metodi PCR-a, kada se taj postupak provodi umjetno u laboratoriju. Za to se nukleinska kiselina prvo izolira iz uzorka tkiva dobivenog od pacijenta (na primjer, u slučaju sumnje na virusni hepatitis).

On obavlja ulogu neke vrste "matrice" na kojoj se provodi sinteza. Nukleinska kiselina ima svoj "imprint" - jedinstveni slijed nukleotida od kojih se sastoji. Za svaki patogen, takav slijed je proučavan, vrsta "mapa" je sastavljena.

Najvažniji element u PCR je primer (kratki dijelovi DNK komplementarni (odgovarajući) na regije nukleinske kiseline izolirane iz uzorka). Primeri osiguravaju početak i specifičnost reakcije.

Dakle, testni sustav za PCR sastoji se od mješavine nukleinskih kiselina ispitivanog uzorka, primera i posebnih enzima (polimeraza) kroz koje je ova reakcija nemoguća. PCR analiza uključuje nekoliko ciklusa (koraka), čime se dobivaju točne kopije prepoznatljive regije predložene nukleinske kiseline. Ti se ciklusi ponavljaju 30-50 puta u skladu s određenim programom. Konačni produkt ove reakcije prepoznaje gel elektroforeza.

Indikator "osjetljivosti"

Jedan od najvažnijih kriterija za dijagnostičku učinkovitost bilo koje laboratorijske analize je indikator "osjetljivosti". Treba razlikovati analitičku i dijagnostičku osjetljivost. Analitička osjetljivost primijenjena na PCR je minimalni broj kopija DNA ili RNA u 1 ml otopine uzorka, što se može odrediti ovim testnim sustavom.

Većina komercijalnih ispitnih sustava može otkriti željenu nukleinsku kiselinu u biološkom uzorku, čak i ako je njegova koncentracija nekoliko stotina kopija po 1 ml uzorka. To je povezano s općom situacijom koja određuje kliničku prikladnost bilo koje laboratorijske dijagnostičke metode ili ispitnih sustava - dijagnostička osjetljivost metode ne smije biti manja od 95-98%.

Drugi univerzalni kriterij laboratorijske učinkovitosti je "specifičnost", što određuje postotak zdravih ljudi koji imaju istinski negativne rezultate analize. PCR metoda ima najveću specifičnost koja doseže 99-100%.

Dijagnostička osjetljivost i specifičnost PCR-a su usporedivi i često nadmašuju one koje se daju drugim metodama koje su "zlatni standard" u dijagnozi zaraznih bolesti.

Rezultati PCR analize mogu se dobiti u roku od jednog radnog dana, dok se uzorci uzeti za analizu mogu pohraniti (nakupljeni) čak i za nekoliko tjedana uz poštivanje odgovarajućih temperaturnih normi. Sažeta procjena osjetljivosti različitih dijagnostičkih metoda koje su nedavno provedene u nekoliko inozemnih istraživačkih centara pokazalo je da ELISA ima osjetljivost od 50-70%, a PCR - od 90 do 100%.

PCR, u usporedbi s ELISA i drugim metodama, ima dvije važne prednosti: visoku osjetljivost i kratko vrijeme analize, tj. "Relevantnost" dobivanja rezultata istraživanja od strane liječnika i pacijenta.

Prije drugih metoda kliničke laboratorijske dijagnostike, postoje prednosti PCR-a:

- Metoda omogućava otkrivanje bilo koje DNA i RNA, čak iu slučajevima kada se koriste druge metode, nemoguće je učiniti;

- metoda ima visoku specifičnost (do 100%). To je zbog činjenice da je u istraživanom materijalu pronađen jedinstveni fragment nukleinske kiseline koji je karakterističan samo za određeni patogen ili gen;

- mogućnost provedbe ne samo kvalitativne (dostupnosti), već i kvantitativne (koncentracije) procjene sadržaja nukleinske kiseline. Trenutno, uz pomoć komercijalnih sustava ispitivanja, moguće je odrediti nekoliko stotina primjeraka u uzorku koji se istražuje;

- visoka proizvodljivost i automatizacija metode omogućuju liječniku da dobije rezultate studije i dijeli s njima pacijenta na dan analize;

- PCR omogućuje identificiranje patogena u tijelu prije razvoja bolesti, na primjer, u razdoblju inkubacije;

- za provedbu PCR analize, dovoljna je minimalna količina uzorka (do nekoliko mikrolitara);

- PCR analiza omogućuje istodobnu dijagnostiku nekoliko patogena u jednom uzorku, ne dovodeći u pitanje osjetljivost ili specifičnost rezultata;

- Dobiveni rezultati PCR mogu se unijeti u prijenosnike informatičkih podataka ili fotografirati za daljnju procjenu nezavisnih stručnjaka.

Unatoč gore navedenim prednostima, PCR metoda još uvijek nije bez nekih nedostataka koje treba razmotriti prilikom procjene rezultata istraživanja:

- najveći zahtjevi za laboratorijsku opremu, kvalitetu ispitnih sustava i najstrože pridržavanje propisa o istraživanju kako bi se izbjegli lažni rezultati. Rješavanje problema kvalitete analiza je moguće uz odgovarajuću kvalifikaciju osoblja i obveznu certificiranost laboratorija;

- dvosmislena procjena pozitivnog rezultata PCR-a. To je činjenica da je često nerazuman argument praktičara zbog sumnje u dobiveni rezultat i učinkovitost PCR metode. Na primjer, kod pojedinaca s DNA patogena otkrivenom u krvi PCR metodom, bolest se ne može klinički razviti.

U ovoj situaciji, prilikom ocjenjivanja PCR analize, treba govoriti o zaraženom pacijentu, a ne o razvoju zarazne bolesti. Metoda PCR analize omogućuje utvrđivanje prisutnosti ili odsutnosti patogena, u velikoj mjeri odgovara na pitanje "liječiti ne liječiti", a također omogućava procjenu kvalitete liječenja praćenjem prisutnosti ili odsutnosti patogena. Liječnik, ocjenjujući rezultat PCR analize, shvaća da taj rezultat nije jedini argument pri donošenju odluke o početku liječenja ili odbijanju terapije.

Testni sustavi razvijeni su za svaku vrstu virusnog hepatitisa, ali najvažnija metoda PCR-a pronađena je u dijagnozi hepatitisa B, C, D, G. PCR metoda je iznimno važna za dijagnozu hepatitisa B. To je zbog činjenice da postoje mutanti (s promijenjenim svojstvima), koji nisu određeni konvencionalnim serološkim testovima.

Metoda PCR analize omogućuje prepoznavanje, a koji oblik je hepatitis 15 virus, bez obzira je li sposoban za neovisnu reprodukciju ili integriran (integriran) u DNA stanice domaćina. To je od kritičnog kliničkog značaja jer s integrativnim oblikom ove infekcije, osoba nije zarazna prema drugima (sigurnost za seksualni partner, profesionalna kondicija, nema rizika vertikalnog prijenosa virusa od majke do fetusa, itd.).

Osim toga, antivirusna terapija nije indicirana za takve bolesnike, štoviše, to je čak i opasno. Međutim, s integrativnim oblikom infekcije, vjerojatnost razvoja raka jetre dramatično se povećava (za više od 200 puta). Takvi ljudi moraju biti podvrgnuti sveobuhvatnom kliničkom, laboratorijskom i instrumentalnom pregledu najmanje jednom godišnje.

PCR metoda može djelovati kao sudac za utvrđivanje potrebe za početkom liječenja i praćenju njegove učinkovitosti. Brzo nestajanje DNA virusa hepatitisa B iz krvi je izravan i pouzdan test uspješnog ishoda antivirusnog liječenja.

Dakle, određivanje DNA virusa hepatitisa B u krvnoj plazmi najvažnija je analiza koja, zajedno s drugim laboratorijskim testovima, omogućuje objektivno dijagnosticiranje infekcije, određuje prirodu infektivnog procesa, djeluje kao kriterij u provođenju terapije i procjenjuje njegovu učinkovitost.

Metoda PCR analize ne odgovara u dijagnozi, procjeni prognoze i uspjehu antivirusne terapije infekcije uzrokovanim virusom hepatitisa C. Korištenje PCR omogućuje otkrivanje virusa hepatitisa C u najranijoj fazi procesa infekcije, budući da se hepatitis C virus RNA može detektirati u krvnom serumu tjedan dana nakon infekcije. Ovom metodom određene su genetske sorte ovog virusa, koje dopuštaju liječniku da propisuje točan tretman.

U slučaju virusnog hepatitisa D, metoda PCR analize omogućuje određivanje virusne RNA u serumu pacijenta, kao i mješoviti hepatitis B i D infekcija. Stoga se ova metoda istraživanja može koristiti za praćenje učinkovitosti liječenja, prognoze tečaja i ishoda bolesti. Za liječnika je važno utvrditi postoji li mješovita infekcija, budući da hepatitis D povećava nekrotični učinak u hepatitisu B i time povećava rizik njegovog razvoja.

Metoda PCR analize je trenutno jedini način dokazivanja prisutnosti infekcije virusom hepatitisa C.

Razmotriti uporabu dijagnostičkih metoda za različite hepatitis.

Hepatitis E. Glavni dijagnostički znakovi hepatitisa E virusa su: vodeni prijenos pretpostavka mehanizam, pacijentova dob od 20 do 40 godina, proliferacija pretežno u predjelima tropske i suptropske zone, kliničke manifestacije, kao što su hepatitis A s učestalosti blagog, registracija teška prijetnja smrtonosan u trudnicama u drugoj polovici trudnoće, rjeđe u ranom poslije porođajnom razdoblju i kod majki koje se bave (se javljaju kod intenzivne hemolize, hemoglobinurije, akutne bubrežne bolesti dovoljnost i teški trombohemoragijski sindrom). Potvrđuje dijagnozu otkrivanja protutijela u krvi.

Virusni hepatitis B Hepatitis B liječnici sumnja ako bolesna 45-180 dana prije početka krvi bolesti pretočena ili njegovih dijelova (eritrocita, leukocita, trombocita masenom) provodi operaciju, studije unutarnje, multiple injekciju (uključujući lijek ), ili ono što se događa mnogo rjeđe ako je pacijent imao seksualni ili intimni kontakt s pacijentima s hepatitisom B. kriteriji početkom potvrdu dijagnoze je otkrivanje u krvi HBs, HBe i HBC antigena i virusni DNA.

Serološki markeri za akutni hepatitis B

Hepatitis C. Za razliku od hepatitisa B, za dijagnosticiranje antigenskog i protutijelnog biljega uz hepatitis C, ELISA je zahvaćena samo antitijela koja su povezana s niskom koncentracijom virusa u krvi. Antigeni virusa hepatitisa C mogu se otkriti u uzorcima biopsije jetre.

Laboratorijska dijagnoza uključuje tri glavne vrste testova.

Serološki markeri za akutni hepatitis C

Otkrivanje protutijela. Unatoč visokoj specifičnosti, moderni sustavi dijagnostičkih enzima imunoanalize nisu osigurani od pretjerane dijagnostike, to jest, pozitivnih rezultata odgode. Da bi ih izuzeli, također se zahtijeva procjena na temelju rezultata analiza dobivenih u različitim vremenskim intervalima. Lažno negativni rezultati su također mogući kada se antivirusna antitijela ne mogu otkriti, unatoč prisutnosti virusa u tijelu. To se događa u sljedećim slučajevima:

- početno razdoblje bolesti;

- dok pacijenti uzimaju imunosupresante - lijekove koji potiskuju imunološki sustav;

- kod infekcije s nekim genotipovima (prije svega 3 i 4).

Trenutno se proizvodi komercijalni testni sustavi za otkrivanje antitijela na hepatitis C virus prvog genotipa. Međutim, takvi testovi možda neće biti dovoljno učinkoviti za pouzdano otkrivanje antitijela kada su zaraženi virusom drugog genotipa. Ovo je od velike važnosti za regije u kojima prevladavaju druge vrste virusa. Stoga je potreban vrlo osjetljivi test koji može reagirati s protutijelima na virus hepatitisa C bilo kojeg genotipa za učinkovitu dijagnozu hepatitisa C.

Određivanje virusne RNA. Do sada se ovaj test smatra "zlatnim standardom" u dijagnozi hepatitisa C. Za to je najčešće korištena klasična inačica lančane reakcije polimeraze (PCR). Uz pomoć je moguće pratiti reprodukciju virusa, kao i suditi njegovu prisutnost u jetri i drugim tkivima. Definicija RNA najčešće se koristi za potvrđivanje rezultata otkrivanja antitijela, što čini ranu dijagnozu akutnog hepatitisa (virusna RNA može se otkriti već 7-21 dana nakon infekcije, tj. Dugo prije pojave prvih protutijela), za praćenje trudnica tijekom perinatalnog perioda infekcije i praćenje učinkovitosti antivirusne terapije.

Podaci iz ova dva testa dobro se nadopunjuju. Pozitivni rezultati PCR analize u kombinaciji s negativnim rezultatima za antivirusna antitijela karakteristični su za neka razdoblja akutnog hepatitisa. Negativni pokazatelji PCR analiza na pozadini pozitivnog testa antitijela mogu biti posljedica niske koncentracije virusa (nije moguće detektirati u PCR) u krvi. Ponovljeni pozitivni PCR testovi krvi odražavaju aktivaciju virusa u stanicama jetre ili drugih organa.

Također, PCR se upotrebljava za otkrivanje virusa u jetrenom tkivu tijekom biopsije. To daje potpunije informacije o razvoju infektivnog procesa, budući da virus može biti u hepatocitima dulje vrijeme bez ulaska u krv ili prisutnost u njemu pri niskim koncentracijama. To se najčešće pojavljuje u ranim fazama infekcije, ali je također uočeno kod kroničnog hepatitisa.

Definicija proteina (antigena) virusa hepatitisa C. Glavna mogućnost otkrivanja bjelančevina virusa hepatitisa C ustanovljena je neposredno nakon otkrića virusa u imunofluorescentnoj studiji tkiva preuzetih iz jetre osoba s kroničnim hepatitisom C zaraženim čimpanzama i inficiranih tim virusom.

Određivanje virusnih proteina (antigena) u serumu zbog njihovog malog sadržaja nije bilo moguće dugo. Tek nedavno su razvijeni metodološki pristupi za imunofermentalno otkrivanje unutarnjeg C-proteina u krvi i organiziranje prvih komercijalnih testnih sustava. Njihovo uvođenje u praksu omogućit će rješavanje kontroverznih pitanja dijagnoze na ekonomičnijoj osnovi od definicije virusne RNA. Određivanje razine AlAT je najjeftiniji način za procjenu aktivnosti tijekom hepatitisa C. Međutim, jednom dobiveni podaci možda neće biti dovoljni za određivanje ozbiljnosti bolesti.

Važnije informacije o oštećenju jetre mogu se dati određivanjem koncentracije ALT-a nekoliko mjeseci. Da biste dobili informacije o opsegu oštećenja jetre koja nije dostupna s drugim metodama istraživanja, liječnik može dati biopsiju jetre. Podaci dobiveni kao rezultat ovog postupka omogućuju odlučivanje u korist pokretanja ili otkazivanja antivirusnog tretmana.

Članak koristi materijale iz otvorenih izvora: Autor: Trofimov S. - Knjiga: "Bolesti jetre"

SAŽETAK Dijagnoza markera akutnog i kroničnog hepatitisa B i C

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

Disciplina "Zarazne bolesti"

MARKER DIJAGNOSTIKA AKUTSKOG I KRONOGONSKOG HEPATITISA B I C.

Glava. Odjel: Profesor.

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

Otkrivanje seroloških biljega virusnog hepatitisa.... 3 stranice

Serodiagnoza virusnog hepatitisa B............................... 4 stranica

Serodiagnoza virusnog hepatitisa C.....................................10 str

Popis korištenih literature................................. 19 str.

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

Otkrivanje seroloških markera virusnog hepatitisa

Moguće je utvrditi virusnu prirodu hepatitisa i dobiti informacije o svojoj etiologiji samo identifikacijom seroloških markera hepatitis virusa. Takvi markeri uključuju virusne proteine ​​(antigene), specifična protutijela koja proizvode tijelo kao odgovor na infekciju i virusne nukleinske kiseline (DNA ili RNA), koje predstavljaju njegov genom. Kombinacija metoda za otkrivanje specifičnih virusnih ili bakterijskih proteina (antigena) ili protutijela proizvedenih u domaćinu u prisutnosti jednog ili drugog patogena u biološkim tkivima i tekućinama naziva se imunološkim metodama laboratorijske analize. Tijekom proteklih nekoliko desetljeća, metode imunološkog istraživanja postale su široko rasprostranjene. Razlog za to bio je blisko spajanje imunologije i biotehnologije, što je omogućilo razvijanje i primjenu širokog raspona testnih sustava temeljenih na interakciji antigenskih protutijela. Za virusni hepatitis, ELISA se odnosi na neizravne metode otkrivanja patogena, omogućujući uspostavljanje etiologije bolesti. Relativno nedavno, metode genodiagnostike uvedene su u praksu kliničkih dijagnostičkih laboratorija, koje omogućuju otkrivanje i karakterizaciju gena ili besmislenih DNA i / ili RNA sekvenci. Njihov razvoj nastaje zbog razvoja u 1983. Načelu lančane reakcije polimeraze (PCR). Prva izvješća o praktičnoj primjeni PCR-a pojavila su se 1985. godine, a od tada je broj publikacija gdje se PCR koristi kao jedna od metoda istraživanja jedno je od prvih mjesta u svjetskoj znanstvenoj literaturi. Ti se pristupi primjenjuju na otkrivanje i proučavanje zaraznih genoma

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

agensi, otkrivanje markera onkoloških bolesti, otkrivanje genetskih promjena u ljudskom genomu povezanom s određenim funkcionalnim poremećajima. Za razliku od ELISA, PCR analiza se odnosi na izravne metode detekcije patogena u kliničkom materijalu koji omogućuje procjenu aktivnosti virusnog procesa i praćenje procesa širenja patogena u različitim organima i tkivima.

Serodiagnoza virusnog hepatitisa B.

Hepatitis B virus (hepatitis B virus, HBV) pripada obitelji Hepadnoviridae. Genomu virusa zastupa djelomično udvostručena kružna molekula DNA veličine od 3200 bp. Pod svjetlosnom mikroskopijom, HBV izgleda kao sferična čestica promjera 42 nm (Dane čestica) koja se sastoji od jezgre - jezgre u obliku icosaedara promjera 28 nm, unutar koje se nalazi dvolančana DNA, terminalni protein i enzim DNA polimeraze. Nukleodni protein sadrži HBcAg i HBeAg. Vanjska ljuska (7 mm debljine) formira HBV površinski antigen - HBsAg. Virus hepatitisa B je pseudoretrovirus, tj. Njegova DNA može biti djelomično umetnuta u hepatocitni genom.

S AVH i pogoršanjem kroničnog hepatitisa virusne čestice se mogu otkriti u hepatocitima i serumu pacijenta. Uz integrativni oblik kroničnog hepatitisa B i u stupnju remisije, HBV u serumu nije detektiran. Osnova laboratorijske dijagnoze infekcije HBV je utvrđivanje seroloških markera virusne infekcije: HBsAg, HBeAg, anti-HBc klase IgM i IgG, anti-HBe i anti-HBs, HBV DNA i aktivnost virusne DNA polimeraze. Ovisno o tijeku virusnog hepatitisa B, spektar promjena u serološkim markerima izgleda drugačije.

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

HBsAg je glavni marker za HBV infekciju. U akutnom virusu B u većini slučajeva (90-80%) HBsAg se može otkriti u razdoblju inkubacije, počevši od 3-5. Tjedna infekcije. Prosječno trajanje cirkulacije antigena je 70-80 dana. Brz nestanak HBsAg (u prvim danima žutice) s pojavom antiBB-a slab je prognostički znak. U kroničnom hepatitisu B, HBsAg može cirkulirati u krvi pacijenta tijekom mnogih godina. Valja napomenuti da trenutno korištene metode za određivanje HBsAg, uključujući ELISA, imaju prag osjetljivosti. Stoga, u prisutnosti kliničkih znakova hepatitisa i nepostojanja HBsAg u serumu, potrebno je ispitati ostale markere HBV infekcije. Prisutnost HBsAg u krvi ukazuje na prisutnost virusa u jetri i vrlo je vjerojatno u krvi. Niti svaki serum koji sadrži HBsAg sadrži virus hepatitisa B. U nekim slučajevima virusna DNA nije potpuno integrirana u hepatocitnu DNA, ali djelomično, samo regija koja kodira sintezu HBsAg. U tim slučajevima, HBsAg se sintetizira bez drugih komponenti viriona (tj. Bez drugih antigena). Vjeruje se da se ova situacija događa kada je "zdravi" nosač HBsAg. HBeAg virusa hepatitisa B karakterizira visoku infektivnost krvi, što je indikator aktivne replikacije HBV. HBeAg cirkulira u krvi pacijenta samo u prisutnosti HBsAg. U prvom tjednu icterijskog razdoblja otkrivena je u 85-95% pacijenata. Detekcija HBeAg kroz dva mjeseca ili više služi kao prognostički znak razvoja kroničnog hepatitisa. U većini bolesnika s kroničnim hepatitisom s visokom aktivnošću HBeAg procesa, to traje dugo (do nekoliko godina). Protutijela na nuklearni antigen hepatitisa B virusne klase M (anti-HBc IgM) su marker aktivne HBV replikacije i akutne infekcije. Identificirano 1-2 tjedna nakon otkrića HBsAg i traje 2-18 mjeseci. U 4-20% bolesnika s akutnim hepatitisom B, anti-HBc IgM je jedini marker infekcije. u

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

CG U anti-HBc IgM može se otkriti u nekim bolesnicima s nižim titrom nego u akutnoj infekciji, s titrom antitijela koji odražava ozbiljnost hepatitisa. Protutijela na HBcAg klase G (anti-HBc IgG) pojavljuju se gotovo istodobno s anti-HBc IgM. U pravilu, oni ostaju sa svim osobama koje su imale hepatitis B za život. Anti-HBc IgG kruži zajedno s HBsAg u 95% HBsAg nosača. Protutijela na HBsAg (anti-HBs) ukazuju na prethodnu infekciju ili prisutnost imuniteta nakon cijepljenja (zaštitna razina - 10 IU / ml). Oni se pojavljuju u razdoblju oporavka, 4 tjedna nakon nestanka HBsAg, dostižući maksimalnu koncentraciju u 1-2 godine, nakon čega slijedi postupno smanjenje razine nedostupne za otkrivanje suvremenim dijagnostičkim metodama. U nekim slučajevima, anti-HB može cirkulirati za život. Pojava anti-HB-a na pozadini kliničkog poboljšanja u bolesnika s hepatitisom B dobar je prognostički znak. Važno je napomenuti da u dinamici akutne HBV infekcije postoji "prozor" kada HBsAg više nije definiran, a anti-HB se još nisu pojavili. Istodobno se detektiraju anti-HBc IgM i IgG. Iz toga slijedi da je potrebno ispitati bolesnike s AVH za anti-HBc IgM čak i uz negativne rezultate HBsAg i anti-HBs studije. Protutijela na HBeAg (anti-HBe) pojavljuju se u krvi nakon uklanjanja HBeAg i završetka virusne replikacije. Do kraja 9. tjedna akutnog razdoblja hepatitisa B, više od 90% bolesnika ima anti-HBe. Tijekom razdoblja oporavka, anti-HBe može nestati. Međutim, prisutnost anti-HBe nije pokazatelj odsutnosti infektivnosti određenog seruma. Pokazano je da kod brojnih bolesnika tijekom razvoja hepatitisa B (oko 10%), pod utjecajem "imunosnog pritiska" na virus, mutantni oblici nastaju da "izbjegavaju" imunološki nadzor i da se ne uklone. Mutant je izoliran iz nosača anti-HBe, koji nisu mogli proizvesti HBeAg zbog nedostataka u precore regiji i bio je označen kao HBeAg-negativan. Pojava HBeAg-negativnog mutanta dovodi do progresije oštećenja jetre kada

Federalna obrazovna agencija

Državna visokoškolska ustanova visokog stručnog obrazovanja

Ulyanovsk State University

Institut za medicinu, ekologiju i fizikalnu kulturu

Odjel za infektivne i veneralne bolesti kože

kontinuiranu virusnu replikaciju (prisustvo HBV DNK u serumu). Primarna infekcija s HBeAg-negativnim mutantom značajno povećava rizik od fulminantnog hepatitisa. Opisani hepatitis B markeri ispitani su pomoću ELISA. Spektar protutijela (anti-HBe, anti-HBs, anti-HBc IgM, anti-HBc IgG) i antigena (HBsAg, HBeAg) omogućuju utvrđivanje dijagnoze hepatitisa B i određivanje stadija bolesti (tablica 3). Nedostatak ove metode je nemogućnost njegove uporabe u infekciji s mutantnim oblicima virusa, s imunosupresijom (pacijenti s rakom, ovisnici o drogama, itd.) I za kvantitativnu procjenu patogena prisutnog u tijelu. Rješenje ovih problema postalo je moguće zbog uvođenja molekularno-bioloških metoda u praksu kliničkih dijagnostičkih laboratorija.

Tablica 3. Različite kombinacije seroloških markera infekcije virusom hepatitisa B i njihovo tumačenje

Serološka dijagnoza virusnog hepatitisa

m. Chisinau, Blvd. Kartica Traian 7/1

022 944 944 069 944 944 069 944 949
Pon - pet od 7.30 do 19.00, sub 8.00 - 13.00

Ako nema dovoljno kliničkih i epidemioloških podataka koji pretpostavljaju etiologiju hepatitisa, u prvoj fazi ispitivani su sljedeći serološki markeri:

  • HAVAb, IgM (akutni hepatitis A)
  • HEVAb, IgM (akutni hepatitis E)
  • HBsAg, HBcAb (hepatitis B)
  • HCVAb (hepatitis C)

U slučaju pozitivne reakcije na HBsAg i (ili) ukupni HBcorAb potrebno je dodatno razjašnjenje dijagnostike stadija procesa infekcije, testiranje:

Dugotrajna postojanost HBcorAb, s negativnim testovima HBsAg i HBsAb, može biti jedini marker kronične infekcije s mutantnim sojem hepatitisa B.

Dijagnoza ko-infekcije ili superinfekcije virusom hepatitisa Delta:

Za pozitivnu reakciju na HCVAb potrebna su dodatna istraživanja:

  • HCVAb, IgM
  • HCVAb proteinskog spektra u ELISA ili imunoblot
  • HCV, RNA

Za procjenu prognoze hepatitisa C i odgovor na interferonsku terapiju, preporučujemo tipizaciju HCV-a.

Dijagnostičke markere virusnog hepatitisa i klinička interpretacija rezultata

marker

definicija

Klinička interpretacija

Biljezi hepatitisa A

Hepatitis E markeri

Hepatitis B markeri

Hepatitis D markeri (delta)

Hepatitis C markeri

Hepatitis G markeri

Preporučena količina pregleda prije cijepljenja:
Prije cijepljenja za hepatitis B virus, potrebno je provesti studiju:

Identifikacija visokog titra zaštitnih protutijela: HBsAb ukazuje da je infekcija već prenesena, da postoji stabilan imunitet i da nema potrebe za cijepljenjem. Pozitivne reakcije na HBsAg i HBcAb koji ukazuju na prisutnost infekcije zahtijevaju individualnu odluku o prikladnosti uvođenja cjepiva.

Izvor: USAID, ministar Sanatatii al Republicii Moldova. Dijagnostiku laboratorija na virus hepatitisa B, C si D. Instructiuni metodice, 2007

U slučaju negativnih reakcija u otkrivanju biljega virusnog hepatitisa A, B, C i D, hepatitis uzrokovan Epstein-Barr virusa i citomegalije treba isključiti:

  • CMV, IgG
  • CMV, IgM
  • EBV ranog antigena, IgG
  • EBV nuklearni antigen, IgG
  • EBV VCA (kapsidni antigen), IgG
  • Epstein Barr Virus VCA (kapsidni antigen), IgM

LABORATORIJSKA DIJAGNOSTIKA VIRUSNE HEPATITISA

A. A. Asratyan Institut za epidemiologiju i mikrobiologiju N.F.Hamal i RAMS,
Moskovska medicinska akademija. IMSechenov

Osnova laboratorijske dijagnoze virusnog hepatitisa su:

- poznavanje njihovih patogena i replikacija

- informacije o pojavljivanju i nestanku markera infekcije

- moderne imunokemijske i molekularne biološke metode za otkrivanje antigena, protutijela i nukleinskih kiselina /

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa B (HB) Struktura viriona, vidi sl. 1.

Laboratorijska dijagnoza HBV temelji se na identifikaciji HB antigena specifičnih za i relevantna protutijela u krvi, kao i na virusne nukleinske kiseline, od kojih su glavne:

anti-HBs klasa Ig M i IgG

NVE Ag - anti-NVE

Najčešće korištena u dijagnozi HBs je definicija HBsAg. Ovaj antigen detektiran je i kod akutnih i kroničnih bolesti (međutim, akutna infekcija obično potvrđuje prisutnost visokih titara anti-HBc IgM). U akutnom HBV, površinski antigen virusa detektira se nakon 3-5 tjedana od trenutka infekcije, tj. Dugo prije pojave kliničkih znakova bolesti i u tim slučajevima je jedini serološki marker. HBsAg se konstantno detektira u predicterijskim i icterijskim razdobljima bolesti. Postojanost HBsAg za 6 mjeseci ili više ukazuje na dugotrajni ili kronični tijek bolesti, i ukazuje na kronično nosač stanje virusa. Eliminacija HBsAg i pojavljivanje antitijela na nju su nezaobilazni uvjet za oporavak. Serološki markeri HBV replikacije su anti HBs klase IgM, HBeAg, DNA i DNA polimeraze, koji se otkrivaju u akutnom HBV od prvog dana kliničkih manifestacija i mogu se otkriti tijekom pogoršanja kroničnog HBV. Serološki markeri HBV replikacije određeni su i za opću dijagnostiku i za procjenu učinkovitosti korištene terapije. HBcAg je detektiran u tkivu jetre i nije detektiran u serumu. Posredstvom njegove prisutnosti u tijelu odražavaju cirkulirajuća antitijela - anti-HBc klasa IgM i IgG. U akutnom razdoblju HB prisutnost anti-HBc klase IgM je dodatni marker ove bolesti. Međutim, potrebno je uzeti u obzir da oko 50% bolesnika s kroničnim hepatitisom B također može imati ta antitijela u razdoblju pogoršanja, ali češće pri niskim koncentracijama. Prisutnost samo anti-HBc klase IgG u serumu je primijećena između nestanka HBsAg i stvaranja anti-HBs. Kombinacija detekcije anti-HBc klase IgG u niskom titru s anti-HBs ukazuje na prenesenu HB infekciju i prisutnost imunosti. Ispitivanje HBeAg provodi se u krvnim serumima samo uz prisustvo HBsAg i pozitivni rezultat ovog markera ukazuje na aktivni proces - potvrđuje dijagnozu akutnog HBV ili ukazuje na pogoršanje kroničnog HB. Trajanje cirkulacije HBeAg ima važnu prognostičku vrijednost: identifikacija HBeAg 2 ili više mjeseci nakon nastupa bolesti ukazuje na mogući razvoj kroničnog hepatitisa. Otkrivanje HBeAg bez prisutnosti HBsAg u serumu u većini slučajeva ukazuje na pogrešan rezultat analize. Međutim, bolesnike zaražene mutantnim virusom može ostati seronegativne za NVeAg usprkos stalnom nazočnošću infektivnost i anti-HBe prisutnosti HBV-DNA (najosjetljiviji marker tijeku replikaciju HBV) u serumu ukazuje na visoku infektivnost uzorka i aktivnog umnožavanje virusa u tijelu. Pozitivni rezultat može se registrirati u gotovo svim bolesnicima s akutnim HBV usred bolesti. Smanjenje koncentracije u liječenju kroničnog hepatitisa je dobar prognostički znak koji ukazuje na učinkovitost korištene terapije. Visoka aktivnost serumskih aminotransferaza odražava upalna oštećenja tkiva jetre uzrokovana prvenstveno reakcijama imunološkog sustava tijela protiv hepatocita inficiranih virusom, a ne izravnim citopatskim učinkom virusa. Visoka razina HBV DNA u kombinaciji s niskom razinom aminotransferaza ukazuje na nedostatan imunološki odgovor organizma. Detekcija anti-HBe u odsutnosti HBeAg i HBV DNA ukazuje na to da je aktivna replikacija infekcije završila. HBsAg serokonverzija antiHBs događa u 90-95% bolesnika s akutnim hepatitisa B u fazi rješavanja infektivnog procesa, te je mjera otpornosti na virus hepatitisa B, koji je, prisustvo antiHBs označava prethodno infekcije i prisutnost imunitet na infekciju. Osobe koje imaju protutijela u zaštitnoj koncentraciji (10 IU ili više) ne pate od HS i ne moraju biti cijepljene. Sve primijenjene metode istraživanja za određivanje specifičnih markera HB mogu se podijeliti u dvije skupine - imunokemijske i molekularne biološke. Imunokemijski - glavno mjesto pripada enzimski povezanoj imunosorbenskoj analizi (ELISA) s visokom osjetljivošću i specifičnosti, jednostavnom primjenom i stabilnošću reagensa. Molekularna biološka točka i tekuća hibridizacija, kao i reakcija lančane polimeraze (PCR) - omogućuju otkrivanje prisutnosti HBV DNA, bilo određivanjem virusa specifičnog enzima - DNA polimeraze. HB sAg / anti-HB s Da bi se utvrdio glavni marker HBV, razvijene su razne metode za određivanje antigena pri koncentracijama do 0,05 ng / ml, koje su podijeljene na tzv. "Generacije" (Tablica 1). Trenutno, glavna metoda otkrivanja HBsAg ELISA je važna faza u razvoju laboratorijskoj dijagnostici virusnih hepatitisa u ruskom čelika gospodarstvu (od 1998. godine) usporednim testovima dijagnostičkih proizvoda za ocjenjivanje njihove kvalitete pod pokroviteljstvom Ministarstva zdravstva Ruske Federacije. Suvremeni dijagnostički proizvodi imaju visoku specifičnost, ali mogući su i lažno pozitivni rezultati. Kako bi se razlikovali lažni pozitivi iz istinski pozitivnih rezultata, koristi se neutralizacijski test HBsAg, specifičnog seruma. Temeljito novo za sustav detekcije HBsAg bio je zahtjev domaćim proizvođačima dijagnostičkih lijekova - obvezno uključivanje u testni sustav slabog pozitivnog uzorka kontrole koji sadrži HBsAg u koncentraciji od 1 ng / ml. Da bi se odredio anti-HBsAg, testiran je cijeli spektar imunokemijskih metoda, od kojih je glavni ELISA (za kvalitativnu i kvantitativnu analizu). Anti-Ig klase HBc M i IgG, HBe Ag - anti-HBe (slika 2 i Tablica 2..) Različite izvedbe imunotestu na čvrstoj fazi može se koristiti za testiranje ove oznake: Immunoassay, imuno, himiolyuministsentny i njihove različite izvedbe. HBV DNA se određuje PCR analizom. Trenutno, najčešće korištene metode amplifikacije za otkrivanje HBV DNA. Sada je moguće odrediti HBV DNA u kvalitativnom i kvantitativnom obliku.

Laboratorijske dijagnoza hepatitisa D (NG) virusa hepatitisa D (HDV) - defektni virus, koji sadrži jedan-uzvojnice RNA, koja je potrebna za replikaciju hepatitis B pomoć virusa za sintezu protein omotača, koji se sastoji od od HBsAg, koji se koristi za kapsuliranje u genom IOP. IOP ne pripada niti jednoj od poznatih obitelji životinjskih virusa, a svojstva IOP najbliža su viroidima i satelitnim virusima biljaka. Laboratorijska dijagnoza se provodi otkrivanjem seroloških markera IOP-a, uključujući prisustvo antigena, antitijela na nju i IOP RNA. Detekcija IOP antigena i IOP RNA u serumu ili jetrenom tkivu ukazuje na prisutnost aktivne HG infekcije, međutim, valja napomenuti da se ti markeri ne mogu otkriti u serumu bolesnika s fulminantnim HD. Marker za aktivnu IOP replikaciju je također anti-IOP klasa IgM. Serološki markeri HD infekcije ovise o tome kako je virus nabavljen - u obliku ko-infekcije s HBV (u većini pacijenata, bolest ima akutni tijek i završava u oporavku) ili superinfekcija kod bolesnika s kroničnom HBV infekcijom (to je teže od koinfekcije - 10% fulminantni hepatitis). Kada se u većini slučajeva koinfiksira, antitijela - anti-IOP klasa IgM i IgG - se otkrivaju tijekom tijeka bolesti. Anti-IOP titar se obično reducira na praktički neprepoznatljive razine nakon oporavka, i nema seroloških markera koji su ikada bili zaraženi IOP-om. IOP antigen detektira se samo u 25% pacijenata i obično nestaje s nestankom HBsAg. Kada su superinfektirani u bolesnika s kroničnom HBV infekcijom, serološka slika ima sljedeće karakteristike: - titar HBsAg se smanjuje do vremena kada se IOP antigen pojavljuje u serumu; - IOP antigen i RNA-IOP i dalje se detektiraju u serumu, kao što se obično u većini bolesnika s super-infekcijom HG (70-80%) razvija kronična infekcija, za razliku od slučajeva koinfekcije; - Odredeni su titri visoke antitijela (anti-IOP) i IgM klase i IgG, koji traju neograničeno. Serološki markeri DG virusa određeni enzimskim imunološkim ispitivanjima i analizom radioimunoloških analiza, te RNA-IOP metodom lančane reakcije polimeraze. Domaća i strana industrijska biotehnološka poduzeća proizvode dijagnostičke setove, uključujući sve potrebne komponente i reagense za test. U dijagnostičkim preparatima koristi se delta antigen izveden iz marmotske jetre eksperimentalno inficirane s HD; antigen izoliran iz jetre mrtvih nosača IOP-a; Delta antigen, dobiven metodom genetičkog inženjerstva.

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa C (HS) Otkrivanje uzročnika HS postalo je moguće zbog metoda molekularne biologije 1989-1991. Prvo, virusni genom je dobiven kloniranjem iz seruma bolesnika s hepatitisom "ni-A, ni-B", a zatim je ustanovljena struktura virusa. Fizičko-kemijska karakterizacija virusa omogućila je klasifikaciju HCV-a kao obitelji flavovirusa. Genom HS virus (HCV), predstavljen pozitivnim jednolančane RNA koja se sastoji od 10 000 nukleobaza čine regije koje kodiraju tri strukturalne proteine ​​(C, E1, E2), te pet nestrukturalni (NS2, NS3, NS4, NS5). Značaj HCV je izrazito velika heterogenost njegovog genoma. Analiza RNA-HCV nukleinskih kiselina različitih izolata pokazala je značajne razlike u njihovoj primarnoj strukturi. Na temelju tih podataka podignuta je klasifikacija HCV-a, podijelivši ih u varijante (6-9) i podtipove - genotipove, od kojih su neki prisutni u svim regijama svijeta, a drugi samo u pojedinim zemljama. Laboratorijska dijagnostika HS-a riješena je suvremenim metodama molekularne biologije, s obzirom da kada HS virus je u ekstremno niskim koncentracijama, a antigeni nisu dostupni za detekciju pomoću suvremenih metoda indikacije, napori istraživača usmjereni su na otkrivanje antitijela na različite antigene komponente virusa čija detekcija može Naznačite prisutnost virusa. Antigeni koji se koriste su proteini kodirani strukturnom i nestacionarnom zonom RNA-HCV, dobivenom rekombinantnom tehnologijom ili sintezom (polipeptidi koji se koriste u modernim imunološkim metodama su C22-3, C33c, C100-3, C200, NS5, S-1-1 ). Laboratorijska dijagnoza HS se temelji na otkrivanju seroloških markera HCV: antitijela na HS virus (anti-HCV, anti-HCV IgM, IgG) pomoću ELISA i RNA-HCV pomoću PCR. Do danas je razvijeno 4 generacije ispitnih sustava za otkrivanje anti-HCV u ELISA metodi, ali prva generacija ELISA se trenutno ne koristi zbog niske osjetljivosti. RNA-HCV je pokazatelj aktivne replikacije HCV i najranijeg markera infekcije, a može se otkriti lančana reakcija polimeraze već 1-2 tjedna nakon infekcije, neposredno prije povećanja razine transaminaze u serumu. Anti-HCV detektira se 5-6 tjedana nakon pojave hepatitisa u 80% slučajeva i 12. tjedna u 90% osoba koje koriste enzimski imunoanalizu. Kod određivanja anti-HCV, u nekim slučajevima zabilježena je lažno pozitivna reakcija. Kako bi se razlikovali lažno pozitivni uzorci od uzoraka koji sadrže protutijela na HCV, razvijeni su dodatni testovi - rekombinantni imunoblot, određivanje spektra anti-HCV proteina. Imunobloting dijagnostici dopuštaju isključivanje nespecifičnih rezultata dobivenih ELISA-om, međutim, vizualna procjena imunoblotnih traka može biti nejasna u različitim dijagnostičkim centrima. U našoj zemlji, domaći potvrdni enzimski sustavi za imunoanalizu (tzv. Spektr sustavi), koji se temelje na otkrivanju antitijela na specifične virusne antigene: jezgra, NS3, NS4ab, NS5a, postali su sve rasprostranjeniji. Detekcija HCV RNA smatra se "zlatnim" standardom u dijagnozi HS i potvrde pozitivnih rezultata otkrivanja anti-HCV. Trenutno, PCR u kvalitativnom i kvantitativnom obliku koristi se za označavanje HCV RNA. Osjetljivost metoda za određivanje HCV RNA povećava se svake godine, a trenutno doseže 10-50 kopija RNA u 1 ml krvi. Dijagnoza kroničnog HS u osoba s anti-HCV obično se vrši na temelju povišenih hepatičkih testova dulje od 6 mjeseci.

Laboratorijska dijagnostika hepatitisa A (HA) Virus HA (Slika 3) je 27 nm virus koji sadrži RNA, klasificiran kao pikornavirus. U svim izoliranim skupinama u različitim dijelovima svijeta, postoji samo jedan serotip HAV. HAV nema vanjsku ljusku, ali se sastoji od vanjske proteinske kapsule ili kapsida, koje sadrže pozitivnu jednolančanu RNK, koja djeluje kao predložak za proizvodnju virusnih proteina unutar stanice domaćina. Laboratorijska dijagnoza HA temelji se na otkrivanju markera HA virusa - HAV antigena, protutijela (anti-HAV IgM i IgG), kao i HAV RNA. Konačni dokaz tekuće ili nedavne infekcije je prisutnost protutijela IgA klase IgM (anti-HAV IgM) i prisutnosti HAV-a u izmetu u serumu (čak iu jednom serumskom uzorku). Prisutnost antitijela na HA, kao i dugotrajni imunitet, naznačena je prisutnošću protutijela na HAV IgG klasu (anti-HAV IgG). Dijagnoza akutne HA potvrđena je u akutnoj ili ranoj fazi oporavka u prisutnosti anti-HAV IgM klase koja se pojavljuje u posljednjih 5-10 dana inkubacijskog perioda i koja se i dalje detektira 6-7 mjeseci od pojave bolesti. Osim toga, ova protutijela mogu se otkriti u prvih mjeseci kod pojedinaca (20-30%) cijepljenih s inaktiviranim HA cjepivom. Njihova formacija je povezana s primarnim imunološkim odgovorom na uvođenje antigena, a ne na infekciju uzrokovanu cjepivom. HAV RNA može se detektirati nekoliko dana prije povećanja ALT aktivnosti i unutar 5 do 59 dana od bolesti s tipičnim tijekom HA; u dugotrajnim slučajevima, HAV RNA se može mjeriti u prosjeku do 95 dana. Antigen HA virusa (HAV-Ag) nalazi se u izmetu pacijenata 7-10 dana prije pojave kliničkih simptoma i prvog dana bolesti, koji se također koristi za ranu dijagnozu i identifikaciju izvora zaraznog agensa. Koncentracija HAV u fecesu je najviša 2 tjedna. prije pojave žutice. Kod odraslih, izlučivanje virusa s izmetom obično traje manje od tjedan dana nakon pojavljivanja žutice. Virus je, međutim, otkriven i nakon 2 mjeseca. od pojave bolesti (tijekom pogoršanja). Djeca mogu izlučiti virus dulje od odraslih, vjerojatno unutar nekoliko tjedana nakon kliničke manifestacije bolesti. Kronično pražnjenje HAV-a iz izmeta se ne poštuje. Definicija HAV antigena također je pronađena primjena u sanitarnoj virologiji u proučavanju vode zbog prisutnosti virusa. Anti-HAV klasa IgG (slika 4) također se pojavljuje rano početkom bolesti (od 3-4 tjedna), traje tijekom cijelog života i pruža cjeloživotnu zaštitu od ove bolesti. Definicija anti-HAV IgG koristi se za proučavanje imunološke strukture populacije i dinamiku specifičnog humoralnog imuniteta. Određivanje anti-HAV IgG klase također je važno za screening prije i poslije cijepljenja (minimalna zaštitna koncentracija anti-HAV odgovara 20 IU / l). Za njihovo određivanje, domaći proizvođači proizvode komercijalne dijagnostičke enzimske imunološke pripravke. Laboratorijska dijagnostika temelji se na otkrivanju markera HA virusa pomoću specifičnih imunodiagnostičkih metoda - ELISA i RIA metoda. Domaća i strana industrijska biotehnološka poduzeća proizvode dijagnostičke setove, uključujući sve potrebne komponente i reagense za test. Uz ELISA i RIA u krutoj fazi, također se uspješno koristi metoda imunoelektronske mikroskopije i metode PCR. Sve gore navedene metode imunodijagnostike s jednakom vjerojatnošću otkrivaju neprimjetne, ne-simptomne ili klinički izražene oblike HA. Posebno mjesto u laboratorijskoj dijagnostici GA-a zauzima metode molekularne genetike za HAV RNA. PCR dijagnostika može detektirati HAV RNA u koncentraciji od 40 kopija / ml. Trenutno postoji akumulacija podataka o mjestu PCR u sustavu laboratorijske dijagnoze GA.

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa E (HEU) Etiološki agens hepatitisa E (HE) je kuglasti virus bez vanjske ljuske, jednoslojni RNA virus promjera 32-34 nm. Prilikom donošenja dijagnoze HE u svakom pojedinačnom slučaju potrebno je uzeti u obzir nekoliko dijagnostičkih argumenata: - pacijent ima simptomatski kompleks akutnog i vjerojatno infektivnog hepatitisa, - pouzdanu iznimku od etiološkog sudjelovanja HA i HBV virusa, na temelju negativnih seroloških testova - anti HAV IgM klase i anti-HBs klase IgM - temeljita analiza epidemioloških podataka iz povijesti, ukljuĉujući naznake nedavnih posjeta endemskim regijama, - studiju (ako je moguće) izmet povrijeĊenih prisutnost virusnih čestica po immunoelectron mikroskopije CGU, PCR. Postoje dijagnostičke metode koje se temelje na korištenju imunofluorescentnih protutijela (MFA) za određivanje HEV antigena u izmetu i enzimski povezan imunosorbentni test (ELISA) za određivanje protutijela za HEV-anti-HEV IgM i IgG. Prisutnost anti-HEV klase IgM s visokom frekvencijom određena je u serumu bolesnika s CU u akutnom stadiju bolesti iu razdoblju ranog oporavka; identifikacija anti-HEV IgG klase ukazuje na prošlu HU infekciju. Za dijagnozu GE također se određuje HEV RNA. Domaći proizvođači dijagnostičkih test sustava za otkrivanje virusnih hepatitisa:

MOSKVA i regije - NEARMEDIC - ECOlab - BIOSERVICE

NOVOSIBIRSK - VEKTOR NAJBOLJI - VECTOR MBS (MEDICOBIOL.SOYUZ) - VEKTOR BIALGAMU

LOWER NOVGOROD - MIKROGEN (ranije IMBIO) - DIAGNOSTIČKI SUSTAVI ST. PETERSBURG - AVICENNA - AQUAPAST


Više Članaka O Jetri

Cista

Koje bi koleretske lijekove trebalo koristiti ako se žučni mjehur ukloni

Nakon uklanjanja žučnog mjehura, to je liječnik koji odlučuje koji lijek treba uzeti. Lijekovi moraju dugo piti. Svako tijelo ima svoju funkciju.
Cista

Kako napraviti žučni mjehur radi ukoliko stagnira

Kako žučnjaku djeluje u nekoj osobi, postaje jasno kada prepoznate mjesto organa. Nalazi se pored jetre, ujedinjenog s njezinim kanalom. Prema posljednjoj struji žuči.